养牛牛结核病综合防控措施

牛结核病综合防控措施

熊学凯1,3，陈颖钰2,3，郭爱珍1,3

（1华中农业大学动物医学院；2华中农业大学动物科技学院；3农业微生物学国家重点实验室）

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的人兽共患的一种慢性消耗性传染病，OIE将其列为需上报疾病，在我国属于二类动物疫病。该病以组织器官的结核结节性肉芽肿和干酪样、钙化的坏死病灶为特征，导致病牛渐进性消瘦、咳嗽、生产能力下降，衰竭直至死亡。牛结核病在世界各国均有发生，在我国仍然是最常见的多发性疾病之一。目前，全球范围内每年约有万头牛感染结核，造成的直接经济损失达30多亿美元[1]。另据报道，世界上结核病患者中约有15%是通过饮用了结核病牛所产的牛奶而患病的。牛结核病的流行不仅严重影响到养牛业，尤其是奶牛业的健康持续发展，而且由于交叉感染使人类的健康受到威胁。因此，世界各国均采用检疫和扑杀政策控制牛结核，但是牛分枝杆菌宿主广泛，防控方法单一，净化相当困难。我国牛结核病的流行状况尚不清楚，但总体呈上升和蔓延趋势，在牛结核病的综合防控和净化方面面临着巨大挑战。

1牛分枝杆菌的病原学特征

牛结核病主要是由分枝杆菌属牛分枝杆菌引起，同时还包括结核分枝杆菌和禽分枝杆菌。其中，结核分枝杆菌主要感染人，也可引起牛结核病；禽分枝杆菌主要感染家禽，也可感染牛、猪和人[2]。

牛分枝杆菌为棍棒状，较粗短，不产生芽胞和荚膜，也不能运动，属于革兰氏阳性菌，用一般染色法较难着色，常用萋-尼氏抗酸染色法染色。该菌为专性需氧菌，生长最适温度为37.5℃，最适pH范围为5.9～6.9，在培养基上生长非常缓慢。在含有牛血清或鸡蛋的固体培养基上3周左右才开始生长，呈粟粒大的圆形细小菌落，稍干燥呈鳞屑状。

牛分枝杆菌富含类脂和蜡脂，对外界环境的抵抗力较强，对干燥、湿冷、腐败的耐受力很强。在干燥的痰液中可存10个月，在病变组织和尘埃中可存活2～7个月，在水中可存活5个月，在粪便和土壤中可存活6～7个月，在乳中可存活3个月，在污水中也可存活11～15个月。对热很敏感，60℃30min可将其杀死，在直射阳光下数小时可死亡，℃沸水中立即死亡，因此经巴氏消毒的乳制品已无危险。无机酸、有机酸、碱性物质和季铵盐类消毒剂对该菌无效，但在5%来苏尔、3%～5%甲醛液、70%酒精、10%漂白粉溶液中均可被杀死[3]。

2牛结核病的流行病学

该病主要侵害牛，特别是奶牛，其次是水牛、黄牛，各年龄的牛均可感染发病。此外，由于牛分枝杆菌的宿主范围比较广泛，几乎可以感染大部分的温血脊椎动物，如人、猪、鹿、大象、猴、狒狒、狮子及禽类。

病牛和病人，特别是开放型患者是主要传染源，其粪尿、乳汁、生殖道分泌物、唾液、鼻液、痰液等均能排放病原菌，污染饲料、食物、饮水、空气和环境而散播传染[4]。家畜和人主要通过呼吸道和消化道感染，吸入被污染的飞沫或媒介是传播本病的最主要方式，也可以通过交配传播。犊牛主要是由于吮吸带病原菌的牛奶而感染，成年牛多因与患病牛、病人直接接触而感染。

该病多呈散发或地方性流行，无明显的季节性和地区性。饲养管理不当，如厩舍拥挤、通风不良、潮湿、阳光不足、卫生条件差及日粮营养不足、缺乏运动、使役过重等均可诱发本病。

3牛结核病的临床症状

牛结核病的潜伏期长短不一，一般为10～45d，长者可达数月乃至数年，通常呈慢性经过。因患病器官不同，症状不一，临床中以肺结核、乳房结核及肠结核较为常见，还可见淋巴结核、生殖器结核、脑结核和胸膜结核等。

3.1肺结核

以长期顽固的干咳为特征，且以清晨最为明显。病牛初期易疲劳，食欲、反刍无明显变化，常出现短而干的咳嗽，当病牛起立、运动和吸入冷空气时易发咳嗽。随病情发展，咳嗽加重、频繁，并转为湿咳，咳嗽声音较弱，且咳嗽时表现痛苦，呼吸次数增加，严重时发生气短。鼻液呈黏性、脓性，灰黄色，呼出气有腐臭味。胸部听诊常有啰音和摩擦音，叩诊有半浊音或清浊音。病牛逐渐消瘦、贫血，肩前、股前、腹股沟、颌下、咽及颈淋巴结肿大，纵膈淋巴结肿大时可压迫食道，引起慢性瘤胃臌气。病情恶化时，病牛体温升高至40℃以上，呈弛张热或稽留热，呼吸更加困难，最后可因心力衰竭而死亡。

3.2乳房结核

病牛一般是乳房淋巴结肿大，继而两乳患病区发生局限性或弥散性硬结，硬结无热无痛，表面凹凸不平。泌乳量逐渐下降，乳汁初期无明显变化，严重时可变得稀薄如水。由于肿块形成和乳腺萎缩，两侧乳房变得不对称，乳头变形、位置异常，导致泌乳停止。

3.3肠结核

病牛呈现前胃弛缓症状，食欲下降，消化不良，迅速消瘦，全身乏力，顽固性腹泻，粪便呈稀粥状，带有黏液和脓汁。直肠检查时，腹膜粗糙不光滑，肠系膜淋巴结肿大。

3.4淋巴结核

可见于结核病的各个病型，常见颌下、咽、颈、肩前、股前及腹股沟等部位，淋巴结肿大突出于体表，无热痛。咽后淋巴结肿大时，压迫咽喉，呼吸音多粗厉、响亮；肩前和股后淋巴结肿大时，可引发前后肢跛行。

3.5生殖器结核

病母牛从阴道中流出透明的黄白色黏液，混有血液和干酪样絮片或脓液；情期扰乱，发情次数增加，但不易受孕；孕牛易流产。病公牛附睾肿大，发硬，阴茎前部出现结节、糜烂。

3.6脑结核

病牛多呈神经症状，如惊恐不安，兴奋，肌肉震颤，站立不稳，步态蹒跚，头颈僵硬，眼肌麻痹等，病程后期可见痉挛、昏迷、呼吸与心率失常。

4牛结核病的病理变化

剖检可见多种组织器官形成肉芽肿或粟粒样结节，以肺和淋巴结最为多见。肺部出现针尖至鸡蛋大小的黄白色坚硬结节，切开时有砂砾感，结节中心有干酪样坏死或钙化灶，有的软化、溶解形成空洞。胸膜和腹膜表面形成一些粟粒至豌豆大小、半透明的灰白色、较坚硬的结节，形似珍珠状，又称为“珍珠病”。肠结核发生于小肠或盲肠，肠黏膜可见大小不等的结核结节或局灶性溃疡，溃疡周围呈堤状，底部坚硬并覆有干酪样物。乳房结核多发生于进行性病例，剖开可见有大小不等病灶，内含有干酪样物质，还可见到急性渗出性乳房炎的病理变化。

5牛结核病的检测方法

5.1传统分离培养法

严格按照《结核病诊断细菌学检验规程》，对采取的组织病料或痰液进行一定的处理，将收集到的分枝杆菌接种于酸性罗氏培养基上，约一个月后可见黄色粗糙米粒状菌落即判定为牛分枝杆菌或结核分枝杆菌。此种方法主要依赖于分枝杆菌的生物学特性和培养特征，能获得细菌菌落进行定量，可以检测到～个菌/ml，实验成本低廉，但是检测耗时较长（1～2个周或更长），培养过程中容易污染，总体检出率也不高，还需要运用其他方法进一步验证菌株特异性[5]。

5.2结核菌素试验

结核菌素试验（PPD）是目前国内外应用最多的牛分枝杆菌检测方法，也是OIE推荐的牛结核病诊断方法，具有灵敏、简单和价廉的特点。结核菌素是从结核菌中分离得到的菌体蛋白，并经饱和硫酸铵或三氯醋酸粗提与纯化制成的诊断制品。如果机体感染过结核，免疫B细胞会对结核分枝杆菌产生记忆，当再次用结合菌素去刺激机体，机体会产生超敏反应性炎症，导致皮肤增厚。其结果判断标准为：增加4mm为阳性，2~4mm为可疑，2mm以下为阴性。PPD皮试的缺陷有：工作量和劳动强度大，检测时间间隔较长，测量皮厚时存在人为误差，结果判断主观性强，同时也存在一定非特异性反应。

5.2IFN-γ体外释放检测法

IFN-γ体外释放检测是一种细胞免疫检测方法，IFN-γ主要是由活化的T淋巴细胞及自然杀伤细胞产生，可以用PPD刺激被检抗凝全血中的淋巴细胞24h，由于免疫细胞存在记忆性，如果是已致敏的免疫细胞就会产生大量的IFN-γ，通过检测IFN-γ的数量变化，来间接检测机体是否感染了结核分枝杆菌。此种方法灵敏度与特异性均较高，操作快速简单，只需要较少的血液样本[6]，可实现批量检测。但是IFN-γ的产生依赖于记忆性免疫细胞，本身也缺乏一定特异性，采血后需在24h内进行刺激，只能检测特定时期的感染情况，成本也较高。

5.3抗体检测法

由于抗体检测法快速、简便，可大批量检测，便于实现自动化，具有很好的应用前景，目前的抗体检测法有ELISA与胶体金试纸条两种。

ELISA检测法通过将结核分枝杆菌的特异性抗原包被到固相载体上，对血清中的特定抗体进行定性和定量检测，是一种间接检测结核分枝杆菌的方法。此种方法由于ELISA试剂盒的普遍商品化而更加经济实惠，样本易得，实验操作也简单快捷，可以进行辅助性诊断。但是不同的蛋白的特异性不一样，检测时敏感性和特异性存在一定的差异性。

胶体金试纸条是利用免疫学原理检测牛结核抗体的一种简单快速的方法，建立在胶体金颗粒的特异结构和特性上[7]。当胶体金颗粒上的特异性结核抗原与血清中的结核抗体结合，随着层析效应与检测线上能与抗体反应的抗原结合时，出现一条红色的阳性检测线，而当颗粒继续移动到达质控线，结核抗原会与预先固定好的相应抗体结合而控制试纸条的质量。此方法也存在一定缺点，如试纸条受各种理化因素影响较大，要用特定的缓冲液稀释，降低了检测的灵敏度等。

5.4PCR和多重PCR检测技术

PCR和多重PCR检测技术是利用多聚酶链式反应直接检测样品中的结核分枝杆菌，相对免疫学的间接检测方法则更具有检测意义，医院的结核病诊断及各牛场的牛结核病检测和流行病学调查中。当得到被检样品，如全血，奶样，组织，痰液等标本后，进行样本的初处理，去除脂类和一些杂质，然后集菌并加裂解液或直接煮沸裂解，获得的结核菌DNA样本就可以作为PCR的模板。PCR是针对结核分枝杆菌特异性的基因设计引物，而多重PCR则是针对多个特异基因设计引物，进行多聚酶链式反应扩增，得到特异性的目的条带，从而特异性检测出结核分枝杆菌。多重PCR相对PCR而言更方便快捷，经济实惠，工作量小，一次反应可以检测多个目的基因，但是引物设计要更复杂，对设备和人员的要求也更高[8]。

6牛结核病的综合防控措施

6.1预防为主，积极研发新技术

随着人类结核防控认识的逐步深入，发现根除动物结核其实是根除人类结核的必要前提。由于动物饲养量及流动大幅增大，野生动物宿主的活动及日益频繁的国际贸易，牛结核病的流行率不断上升，以预防为主的疫苗免疫越来越受







































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